March 2024

(주)부경에스엠·염증표지자검사시약, CIC-C1Q ELISA

수입체외진단의료기기
분류번호	K03020.01(2)

[모양 및 구조]

1. 작용원리:  본 제품은 사람의 혈청 또는 혈장에서 C1Q의 정량측정하는 체외진단분석기용 시약이다. BÜHLMANN CIC-C1Q ELISA는 C1Q를 포함하는 검정물질, 대조혈청과 환자 혈청 또는 혈장은 마이크로타이터 웰에 흡착된 사람의 C1q와 배양된다. 세척 후에, 알카리성의 인산염효소가 표지된 표지된 접합체(Protein A)를 가하면, 사람의 IgG의 Fc 영역에 결합한다. 두 번째 세척 후에, 효소기질액을 가하고, 정지액을 가한다. 흡광도는 450nm에서 측정한다.

2. 외형: 본 제품은 마이크로타이터플래이트, 배양완충액, 대조물질, 보정물질, 효소레이블, 기질액, 정지액으로 구성되어 있다.

[원재료]

1. 마이크로타이터플래이트(12x8웰)

2. 세척농축액(1병x100mL)

3. 배양완충액(1병x100mL)

4. 대조물질 저농도, 고농도(2바이알x1mL)

5. 보정물질A-E(5바이알x1mL)

6. 효소레이블(1바이알x11mL)

7. 정지액(1바이알x11mL)

8. 기질액(1바이알x11mL)

[사용목적] 사람의 혈청 또는 혈장에서 C1Q(Circulating Immune complexs, C1Q)를 효소결합면역흡착검사법(ELISA)으로 정량하는 체외진단분석기용시약이다.

[사용방법]

I. 조제방법

1. 시약조제

1) 검정물질: 그대로 사용한다.

2) 검정물질: 그대로 사용한다.

3) 세척용액 농축액: 900mL 증류수로 조제한다.

4) 마이크로타이터 플래이트: 그대로 사용한다.

5) 배양 완충액: 그대로 사용한다.

6) 효소 라벨: 그대로 사용한다.

7) 기질액: 그대로 사용한다.

2. 검체준비: 50㎕의 혈액이 duplicate 검사에 요구된다. plain 튜브에 채혈하고, 용혈을 피하여 검체 튜브를 여러 번 흔들어 혼합하고 실온(18-28℃)에서 빛을 피하여 45분간 clot이 생기도록 방치한다. 1800xg, 15분 동안 실온에서 원심분리하여 혈청을모은다. 검체는 2-8℃에서 7일 동안 저장할 수 있다. -20℃이하에서는 더 오래동안 저장한다.

Ⅱ. 조작방법

1. 검사방법

- ETI-MAX3000(서울수신 03-1184호), ETI-STAR(서울수신 99-1157호), 또는 이와 같은 기능을 가진 기기를 사용하여 검체와 시약을 장착하면 저장된 검사방법에 따라 자동으로 검사되고 측정됨.

- 모든 시약은 사용 전에 18-28℃로 가져온다.

1) 모든 환자 검체는 배양 완충액으로 1:50으로 조제한다(20㎕ 혈청 또는 혈장 + 980㎕배양 완충액). 희석된 검체를 4c 단계에서 파이펫 하기 전까지 18-28℃에서 15분 동안 방치한다.

2) 검정물질, 대조혈청과 검체에 필요한 검사할 충분한 스트립을 준비하여 기기에 장착한다. 남은 스트립은 재밀봉하여 지체 없이 냉장고에 저장한다.

3) 300㎕ 세척액으로 2회씩 코팅된 웰을 세척한다.

4a) 100㎕ 배양 완충액을 A1+A2에 분주한다.

100㎕ 검정물질 A를 B1+B2에 분주한다.

100㎕ 검정물질 B를 C1+C2에 분주한다.

100㎕ 검정물질 C를 D1+D2에 분주한다.

100㎕ 검정물질 D를 E1+E2에 분주한다.

100㎕ 검정물질 E를 F1+F2에 분주한다.

4b) 100㎕ 저농도 대조혈청을 G1+G2에 분주한다.

100㎕ 고농도 대조혈청을 H1+H2에 분주한다.

4c) 100㎕ 희석된 검체를 일련의 웰에 2개씩 분주한다.

5) 400-600rpm plate rotator에서, 18-28℃에서 1시간±5분 동안 배양한다.

6) 웰을 비우고 300㎕ 세척완충액으로 세척된다.(3회)

7) 100㎕ 효소 라벨을 모든 웰에 파이펫한다.

8) 400-600rpm plate rotator에서, 18-28℃에서 30분±5분 동안 배양된다.

9) 웰을 비우고 300㎕ 세척완충액으로 세척된다.(3회)

중요: pNPP 기질액은 18-28℃에 도달하도록 한다.

10) 100㎕ pNPP 기질액을 모든 웰에 분주한다.

11) 400-600rpm plate rotator에서, 18-28℃에서 직사광선을 피하여 30분±5분 동안 배양한다.

12) 100㎕ 정지액을 모든 웰에 분주한다.

13) 마이크로타이터 플래이트 판독기 405nm에서 흡광도를 측정한다.

2. 결과계산

- ETI-MAX3000, ETI-STAR, 또는 이와 같은 기능을 가진 기기에 의해 검정곡선에서 검체의 CIC의 농도가 자동적으로 산출된다.

- 검정곡선:

ㆍ405nm에서 각 보정물질과 블랭크(NSB) 웰의 흡광도를 기록한다.

ㆍ2개의 값을 평균내서, 블랭크 웰(NSB)의 평균을 빼고 평균을 기록한다(=보정된 평균 흡광도).

ㆍlog/log graph를 사용하여 흡광도(수직)와 보정물질의 CIC　농도 ㎍ Eq/ml 양(수평)을 좌표로 한다.

ㆍ4개의 parameter algorithm을 사용하여 가장 적당한 커브를 그리거나 검정곡선을 산정한다.

-검체와 대조물질:

ㆍ405nm에서 각 검체의 흡광도를 기록한다.

ㆍ2개의 값을 평균내서, 블랭크 웰(NSB)의 평균을 빼고 평균을 기록한다(=보정된 평균 흡광도).

ㆍ검체의 보정된 흡광도 값을 수직축에서 수평선을 검정곡선에 그어 교차하는 수평축에서 CIC    농도(㎍ Eq/ml)를 판독한다.

3. Cut-Off Value(각 검사실에서 Cut-Off Value를 설정하는 것을 권장한다.)

Cut-Off Value(mean+2SD)는 3.2 ㎍ Eq/mL 이다.

grey zone: 3.2 - 5.0 ㎍ Eq/mL이고,

5.0 ㎍ Eq/mL 이상이면 양성으로 판정된다.

CIC 정상 범위의 일반적은 한계: CIC의 높은 범위는 어떤 임상적인 표시없는(정상 범위 밖에서 분명한 음성) 정상의 혈액 공여자의 10%에 달한다. 이는 우리의 결과와 좋은 일치를 보여준다: 192의 정상 공여자의 6(3.1%)는 CIC ELISA에서 양성이고 14(7.3%)는 grey zone에 있다.

4. 정도관리: 사용지침의 온전한 이해가 제품의 성공적인 사용에 필요하다. 신뢰성 있는 결과는 정확한 실험 기술의 사용(current GLP guidelines)과 사용지침을 정확히 따르는 것으로 얻어질 것이다. CIC를 위한 대조물질이 상업적으로 가능하지 않으므로, 우리는 내부의 정도관리를 위한 양성 혈청 풀의 사용을 권장한다. 모든 대조물질은 설정된 신뢰 한계 내에 있어야 한다. 보조물질의 신뢰 한계는 lot-specific하고 첨부된 QC Data Sheet에 인쇄되어 있다.

검정물질의 재현성 파라미터와 보조물질 값은 검사실 acceptability의 설정된 한계 내에 있어야 한다. 만약 검사의 정확도가 설정된 한계 내에 있고 반복이 기술상의 에러를 배제한다면, 다음의 문제를 점검하라: i) 파이펫팅, 온도조절과 시간 장치 ii) ELISA reader 세팅 iii) 시약의 유효기간 iv) 저장과 배양 조건 v) TMB 기질 용액은 색깔이 없어야 하고 vi) 물의 순도

[사용시 주의사항]

1. 체외 진단용외 사용을 금지한다.

2. 이 키트의 마이크로타이터 스트라이프, 검정물질과 대조혈청은 사람에서 기원하는 원료를 포함한다. 이는 FDA에서 승인된 방법으로 HBsAg, HCV과  HIV1/2 항체 검사를 하여 모두 음성의 결과를 얻었다. 검사가 상당히 정확할지라도, 이 원료가 간염과 AIDS 전염에 대한 보장이 없으므로, 모든 환자 검체와 키트의 내용물은 감염의 가능성이 있는 것으로 조심스럽게 취급하여야 한다.

3. 기질액과 정지액은 눈, 피부와 점막에 자극을 준다. 피부와 점막에 닿지 않도록 하고, 눈과 피부에 닿았을 경우 많은 양의 물로 씻어내야 한다.

4. 검체나 시약을 취급시 항상 실험가운, 보호 장갑과 보호안경을 착용한다.

5. 제품번호가 다른 키트의 내용물을 혼합하여 사용하지 말고 유효기간이 지난 키트는 사용하지 않는다.

6. 제조사의 지시사항을 주의 깊게 따른다.

[포장단위]  제조원의 포장단위

[보관조건] [사용기한]

번 호	명 칭		개봉여부	보관조건	유효기간(제조일로부터)	비고
1	마이크로타이터 플래이트		미개봉	2~8℃	24개월	완제품
			개봉	2~8℃	2개월
2	세척농축액		미개봉	2~8℃	24개월	완제품
			개봉	2~8℃	4개월	조제후
3	배양완충액		미개봉	2~8℃	24개월	완제품
			개봉	2~8℃	24개월
4	대조물질	대조물질 저농도	미개봉	-20℃	24개월	완제품
			개봉	-20℃	24개월
			개봉	2-8℃	3개월내
		대조물질 고농도	미개봉	-20℃	24개월	완제품
			개봉	-20℃	24개월
			개봉	2-8℃	3개월내
5	보정물질	보정물질 A	미개봉	-20℃	24개월	완제품
			개봉	-20℃	24개월
			개봉	2-8℃	3개월내
		보정물질 B	미개봉	-20℃	24개월	완제품
			개봉	-20℃	24개월
			개봉	2-8℃	3개월내
		보정물질 C	미개봉	-20℃	24개월	완제품
			개봉	-20℃	24개월
			개봉	2-8℃	3개월내
		보정물질 D	미개봉	-20℃	24개월	완제품
			개봉	-20℃	24개월
			개봉	2-8℃	3개월내
6	효소 레이블		미개봉	2~8℃	24개월	완제품
			개봉	2~8℃	24개월
7	기질액		미개봉	2~8℃	24개월	완제품
			개봉	2~8℃	24개월
8	정지액		미개봉	18~28℃	24개월	완제품
			개봉	18~28℃	24개월

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수입판매원: (주)부경에스․엠	제조원: BÜHLMANN Laboratories AG

서울시 강남구 도곡로 205 원경빌딩 5층(역삼동)                     Baselstrasse 55, 4124 Schönenbuch,

Tel : (02) 516-7331                                                   Switzerland / Im Kirschgarten 29, 4124,

Schönenbuch, Switzerland

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